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编者按
数字PCR是近几年发展起来的一种核酸定量分析技术。相较于传统荧光定量PCR来说,数字PCR对结果的判定不依赖于扩增曲线循环的Ct值,不受扩增效率的影响,直接读出DNA的拷贝数,能够对起始样本的核酸分子进行绝对定量,具有更高的灵敏度和准确性。这些独特的技术优势在肺癌的驱动基因敏感/耐药突变检测、判断预后以及液体活检等领域都显示了良好的应用前景。为此,智慧病医院病理科曾瑄教授来谈谈dPCR的临床应用之肺癌篇。
曾瑄/医学博士/医院病理科中华医学会病理学分会乳腺学组委员中华医学会病理学分会分子病理学组委员国家卫计委病理质控评价中心(PQCC)分子病理组委员中国临床肿瘤学会(CSCO)乳腺专家委员会常委中国抗癌协会肺癌专业委员会委员北京医学会乳腺疾病分会常委中国计量测试学会生物计量专业委员会委员《中华病理学杂志》编委大咖有话说系列--dPCR的临床应用之肺癌篇
数字PCR(DigitalPCR,dPCR)是继实时荧光定量PCR(Real-timequantitativePCR,qPCR)之后发展起来的高灵敏核酸绝对定量分析技术,通过把反应体系均分到大量独立的微反应单元(微腔室或微滴)中进行PCR扩增,并根据泊松分布和阳性微反应单元的比例来计算核酸拷贝数实现定量分析。与传统PCR技术相比,dPCR技术不依赖于标准曲线即可实现靶分子的绝对定量,具有更高的灵敏度、准确度及对PCR抑制剂的高耐受性,尤其适用于微量或痕量DNA的检测与定量。这些独特的技术优势,使其在众多研究领域显示出巨大的应用前景。
图1dPCR的扩增原理和步骤
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